Định lượng NAD + và các chất chuyển hóa của nó trong dây thần kinh tọa chuột

Giới thiệu

Các bộ phận quan trọng của nicotinamide adenine dinucleotide (NAD+) và các chất chuyển hóa của nó trong quá trình lão hóa và thoái hóa thần kinh đã được công nhận rộng rãi. Để thúc đẩy tiến bộ hướng tới nghiên cứu sinh hóa và can thiệp nhắm vào các bệnh lão hóa và thoái hóa thần kinh, điều quan trọng là phải định lượng chính xác NAD + và mức độ chuyển hóa của nó trong con đường cứu hộ NAD +. Ở đây, một phương pháp LC-MS / MS mạnh mẽ và chính xác được áp dụng để định lượng NAD + và mức độ chuyển hóa của nó trong dây thần kinh tọa chuột bình thường và bị thương.

Hạn chế của các phương pháp hiện có để định lượng NAD+ và các chất chuyển hóa của nó

Các phương pháp truyền thống để định lượng NAD+ và các chất chuyển hóa của nó, chẳng hạn như HPLC-UV, NMR, điện di vùng mao dẫn hoặc xét nghiệm enzym đo màu, phải đối mặt với nhiều thách thức khác nhau về độ nhạy, tính chọn lọc và đo gián tiếp. Đối với các xét nghiệm LC-MS/MS hiện có cho các phép đo NAD+ tế bào hoặc mô và các chất chuyển hóa của nó, vẫn còn nhiều khó khăn cần khắc phục, chẳng hạn như thời gian chạy kéo dài, hành vi lưu giữ sắc ký kém và hình dạng đỉnh không đạt yêu cầu. Hơn nữa, chỉ có một đến ba chất trong con đường cứu hộ NAD+ có thể được bao phủ bằng các phương pháp này.

Các sửa đổi của phương pháp LC-MS / MS

Trên cơ sở các xét nghiệm LC-MS / MS hiện có, các sửa đổi liên quan đến điều kiện sắc ký, ma trận thay thế và điều kiện MS / MS được tiến hành. Cụ thể, 5 μM axit methylene phosphonic được sử dụng làm phụ gia pha động, giúp thúc đẩy rõ ràng cường độ tín hiệu và hình dạng đỉnh. Với tính chất tương đối sạch và đơn giản của các mẫu không bao giờ và kích thước nhỏ của chúng, nước siêu tinh khiết được thử nghiệm như một ma trận thay thế. Thay vì cột sắc ký lỏng tương tác ưa nước và cột hypercarb, cột Waters Atlantis Premier BEH C18 AX được sử dụng, có công nghệ bề mặt hiệu suất cao MaxPeak HPS độc đáo (thụ động thành trong cột, loại bỏ bề mặt kim loại) cho phép khả năng tái tạo cao, đối xứng đỉnh và tách đường cơ sở của tất cả các chất phân tích.Bên cạnh đó, các điều kiện MS được tối ưu hóa để giảm thiểu tín hiệu nhiễu NAD + trong kênh adenosine diphosphate ribose tuần hoàn (cADPR) trong khi vẫn duy trì phản ứng của cADPR và nicotinamide mononucleotide (NMN), với 4000V cho điện áp phun ion, 450 ° C cho nhiệt độ lò sưởi turbo, 50 psi cho Gas 1, 50 psi cho Gas 2, 30 psi cho khí rèm và 12 psi cho khí va chạm.

Sắc ký đại diện của các mẫu thần kinh (bình thường và bị thương)

Tất cả năm chất phân tích đều đạt được sự tách biệt ban đầu, trong đó cADPR là một dấu ấn sinh học nhạy cảm trong mô hình thoái hóa thần kinh. Ở đây, phẫu thuật cắt xoa thần kinh tọa gây thoái hóa sợi trục, dẫn đến giảm mức NAD + và tăng mức NMN trong các dây thần kinh bị thương, dẫn đến tỷ lệ NMN / NAD + tăng khoảng 2 lần. Đồng thời, nồng độ nicotinamide (NAM) và adenosine diphosphate ribose (ADPR), giảm khoảng 2 lần, trong khi nồng độ cADPR tăng hơn 8 lần. Những kết quả này phù hợp với kết quả của nghiên cứu được báo cáo trước đó, xác minh độ chính xác của phương pháp LS-MS / MS sửa đổi này trong việc định lượng NAD + và các chất chuyển hóa của nó.

Kết thúc

Phương pháp LC-MS/MS sửa đổi này cho phép tách NAD+, NMN, NAM, ADPR và cADPR hiệu quả trong thời gian chạy ngắn 5 phút, góp phần chẩn đoán sớm các rối loạn thần kinh khác nhau và phát triển thuốc cho các bệnh lão hóa và thoái hóa thần kinh.

Tham khảo

Ma Y, Deng L, Du Z. Phát triển và xác nhận phương pháp LC-MS / MS để định lượng NAD + và các chất chuyển hóa liên quan ở dây thần kinh tọa của chuột và ứng dụng của nó cho mô hình động vật bị tổn thương thần kinh. J Chromatogr A. doi: 10.1016 / j.chroma.2024.464821

BONTAC NAD

BONTAC đã dành riêng cho R & D, sản xuất và bán nguyên liệu thô cho coenzyme và các sản phẩm tự nhiên từ năm 2012, với các nhà máy tự sở hữu, hơn 170 bằng sáng chế toàn cầu cũng như đội ngũ R & D mạnh mẽ. BONTAC có kinh nghiệm R & D phong phú và công nghệ tiên tiến trong quá trình sinh tổng hợp NAD và tiền thân của nó (ví dụ: NMN và NR). Có nhiều loại NAD khác nhau được lựa chọn, bao gồm NAD ER Grade (loại bỏ nội xin), NAD Grade I (IVD / thực phẩm chức năng / bột mỹ phẩm), NAD Grade II (API / trung gian) và NAD Grade IV (nếu có yêu cầu cao hơn về độ hòa tan), có thể được cung cấp dưới dạng bột đông khô hoặc bột tinh thể. Độ tinh khiết của BONTAC NAD có thể đạt trên 98%.

Disclaimer

Bài viết này dựa trên tài liệu tham khảo trên tạp chí học thuật. Thông tin liên quan chỉ được cung cấp cho mục đích chia sẻ và học tập, và không đại diện cho bất kỳ mục đích tư vấn y tế nào. Nếu có bất kỳ vi phạm nào, vui lòng liên hệ với tác giả để xóa. Các quan điểm được thể hiện trong bài viết này không đại diện cho quan điểm của BONTAC. Trong mọi trường hợp, BONTAC sẽ không chịu trách nhiệm hoặc nghĩa vụ pháp lý dưới bất kỳ hình thức nào đối với bất kỳ khiếu nại, thiệt hại, tổn thất, chi phí hoặc chi phí nào phát sinh hoặc phát sinh trực tiếp hoặc gián tiếp từ việc bạn phụ thuộc vào thông tin và tài liệu trên trang web này.