01 Tháng Một
Ưu điểm đặc biệt của ELISA siêu nhạy với chu trình Thio-NAD trong việc xác định protein NS1 của sốt xuất huyết
1. Giới thiệu
Sốt xuất huyết là một bệnh truyền nhiễm cấp tính do Virus sốt xuất huyếtthông qua vết cắn của muỗi loài Aedes bị nhiễm bệnh (Ae. aegypti hoặc Ae. albopictus), với các triệu chứng chính như sốt cao, chóng mặt, nhức đầu, phát ban và Nghiêm trọngđau (đau mắt, cơ, khớp hoặc xương), v.v. Bệnh này phổ biến rộng rãi ở khí hậu nhiệt đới và cận nhiệt đới. Ước tính có khoảng 100 đến 400 triệu người bị nhiễm bệnh mỗi năm, trong đó hơn 80% thường nhẹ và không có triệu chứng. Tuy nhiên, sốt xuất huyết nặng có thể làm tăng nguy cơ tử vong nếu không được điều trị đúng cách. Do đó, chẩn đoán sớm bệnh này có ý nghĩa quan trọng đối với việc điều trị kịp thời.Đáng chú ý, protein phi cấu trúc 1 (NS1), một glycoprotein được bảo tồn cao, chủ yếu được tiết ra trong quá trình nhiễm trùng Sốt xuất huyết vi rút, được coi là yếu tố cơ chế bệnh sinh chính của Sốt xuất huyết. Do đó, NSI thường được sử dụng như một dấu ấn sinh học để phát hiện sớm căn bệnh này.
Trong nghiên cứu này, một xét nghiệm hấp thụ miễn dịch liên kết với enzyme bánh sandwich(ELISA)kết hợp với thio nicotinamide adenine dinucleotide (thio-NAD / S-NAD) Phương pháp đạp xe (sau đây gọi là ELISA siêu nhạy) được sử dụng để phát hiện NSI, tiếp theo là so sánh với NAAT để xác nhận độ chính xác phát hiện của nó.
2. Ưu nhược điểm của các phương pháp phát hiện truyền thống đối với Sốt xuất huyết
Hiện tại, tDưới đây là bốn phương pháp phát hiện chính cho Sốt xuất huyết.
Phân lập và xác định vi-rút có độ đặc hiệu cao nhưng tốn thời gian, mất ít nhất 5 ngày. Xét nghiệm kháng nguyên nhanh là nhanh nhất và tiết kiệm chi phí nhất trong số các phương pháp khác, nhưng độ nhạy và độ đặc hiệu tương đối thấp. Xét nghiệm huyết thanh dựa trên IgM và IgG bị giới hạn bởi số ngày nhiễm bệnh, như các xét nghiệm phải được trì hoãn cho đến khi mức độ kháng thể tăng lên mức có thể phát hiện được.
Trong phòng khám, NAAT thường được áp dụng để xác định Sốt xuất huyếtbởi bụi bẩn có độ nhạy và độ đặc hiệu cao của nó. Tuy nhiên, phương pháp này tốn kém, tốn nhiều công sức và dễ bị sai lầm, phải được thực hiện bởi nhân viên được đào tạo. Để khắc phục nhược điểm của các phương pháp này, một phương pháp phát hiện mới ELISA siêu nhạy là được áp dụng trong nghiên cứu này.
3. Quy trình làm việc của ELISA siêu nhạy với chu trình thio-NAD
Một cặp kháng thể Làđược sử dụng để thu giữ protein NS1 trong bánh sandwich ELISA và phosphatase kiềm Làđược dán nhãn trên kháng thể thứ cấp. Ngoài các kháng thể, một dẫn xuất androsterone, 3α-hydroxysteroid dehydrogenase, thio-NAD và NADH làđược sử dụng để xây dựng hệ thống chu trình enzyme thio-NAD. Trong phản ứng chu kỳ thio-NAD, thio-NADH liên tục tích lũy theo dạng số tam giác và có thể được đo trực tiếp ở độ hấp thụ 405 nm.
4. So sánh ELISA siêu nhạy và NAAT trong phát hiện Protein Dengue NS1
Trong NAAT, 60 mẫu dương tính với sốt xuất huyết và 25 mẫu âm tính với sốt xuất huyết. Giá trị ngưỡng chu kỳ NAAT (CT) của những mẫu dương tính với sốt xuất huyết nằm trong khoảng từ 12,42 đến 31,41. Trong ELISA siêu nhạy, 59 mẫu tương ứng dương tính với kết quả NAAT, trong khi 25 mẫu hoàn toàn âm tính tương ứng với kết quả NAAT.So với NAAT, độ nhạy và độ đặc hiệu của ELISA siêu nhạy lần lượt là 98,3% và 100% (Bảng 2). Trong số 60 mẫu bệnh nhân dương tính với sốt xuất huyết được xác nhận NAAT, chỉ có 1 mẫu âm tính trong ELISA siêu nhạy. Dữ liệu NAAT cho thấy mẫu bệnh phẩm là trường hợp nhiễm DENV loại 4 với giá trị CT là 21,59. Kết quả của ELISA siêu nhạy gần như hoàn toàn phù hợp với kết quả NAAT, với giá trị kappa là 0,972 (95% CI: 0,917-1.0).
5. Kết luận
Phương pháp ELISA siêu nhạy rất dễ thực hiện và không cần thực tập sinh chuyên nghiệp để vận hành. Việc phát hiện có thể được bắt đầu ngay sau khi nhận được một mẫu nhỏ. Nó đặc biệt thích hợp để phát hiện sớm bệnh sốt xuất huyết ở các nước có thu nhập thấp.Tham khảo
Chen, Po-Kai và cộng sự. "Phương pháp phát hiện nâng cao cho protein sốt xuất huyết NS1 bằng cách sử dụng ELISA siêu nhạy với chu kỳ Thio-NAD." Virus tập 15,9 1894. 8 Tháng Chín 2023, doi:10.3390/v15091894Ưu điểm và tính năng sản phẩm của BONTAC Thio-NAD/S-NAD
BONTAC là one trong số ít doanh nghiệp trong Trung Quốccó thể sản xuất Thio-NADvới "Bonzyme"Phương pháp toàn bộ enzyme(thân thiện với môi trường;không có dư lượng dung môi độc hại) và công nghệ thanh lọc bảy bước "Bonpure" độc đáo. BONTAC tích hợp R & D, sản xuất và bán hàng, với nhà máy tự sở hữu và một số chứng nhận quốc tế để đảm bảo chất lượng cao và cung cấp sản phẩm ổn định.