Ưu điểm phi thường của ELISA siêu nhạy với chu kỳ Thio-NAD trong việc xác định protein NS1 của sốt xuất huyết
1. Giới thiệu
Sốt xuất huyết là một bệnh truyền nhiễm cấp tính do Virus sốt xuất huyết qua vết cắn của một loài muỗi Aedes bị nhiễm (Ae. aegypti hoặc Ae. albopictus), với các triệu chứng chính như sốt cao, chóng mặt, đau đầu, phát ban và nghiêm trọng đau (đau mắt, cơ, khớp hoặc xương), v.v. Bệnh này phổ biến rộng rãi ở các vùng khí hậu nhiệt đới và cận nhiệt đới. Ước tính có từ 100 đến 400 triệu người bị nhiễm mỗi năm, trong đó hơn 80% thường là bệnh nhẹ và không có triệu chứng. Tuy nhiên, sốt xuất huyết nặng có thể làm tăng nguy cơ tử vong nếu không được điều trị đúng cách. Do đó, việc chẩn đoán sớm bệnh này có ý nghĩa quan trọng đối với việc điều trị kịp thời.Đáng chú ý, protein không cấu trúc số 1 (NS1), một glycoprotein được bảo tồn cao, chủ yếu được tiết ra trong quá trình nhiễm sốt xuất huyết virus, được xem là yếu tố bệnh sinh chính của Sốt xuất huyết. Do đó, NSI thường được sử dụng như một dấu ấn sinh học để phát hiện sớm bệnh này.
In thlà study, a sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) kết hợp với thio nicotinamide adenine dinucleotide (thio-NAD/S-NAD) phương pháp đạp xe (sau đây gọi là ELISA siêu nhạy) được sử dụng để phát hiện NSI, sau đó so sánh với NAAT để xác nhận độ chính xác phát hiện.
2. Ưu và nhược điểm của các phương pháp phát hiện truyền thống cho Sốt xuất huyết
Hiện tại, tDưới đây là bốn phương pháp phát hiện chính cho Sốt xuất huyết.
Phân lập virus và việc nhận dạng có độ đặc hiệu cao nhưng mất nhiều thời gian, mất ít nhất 5 ngày. The kháng nguyên nhanh Kiểm tra là phương pháp nhanh nhất và tiết kiệm chi phí nhất trong các phương pháp khác, nhưng độ nhạy và độ đặc hiệu tương đối thấp. Xét nghiệm huyết thanh dựa trên IgM và IgG bị giới hạn bởi số ngày nhiễm bệnh, như vậy cái xét nghiệm phải được trì hoãn cho đến khi đạt mức kháng thể tăng lên mức có thể phát hiện được.
Trong lâm sàng, NAAT thường được áp dụng để xác định Sốt xuất huyết bởi sự nhạy cảm và đặc hiệu cao của nó. Tuy nhiên, phương pháp này tốn kém, tốn công sức và dễ gây ra sự tích cực giả tạo, điều này phải do nhân viên được đào tạo thực hiện. Để khắc phục những nhược điểm của các phương pháp này, một phương pháp phát hiện mới ELISA siêu nhạy là được áp dụng trong nghiên cứu này.
3. Quy trình làm việc của ELISA siêu nhạy với chu kỳ thio-NAD
Một cặp kháng thể là dùng để bắt protein NS1 trong sandwich ELISA và phosphatase kiềm là labeled on cái secondary antibody. Aside from cái antibodies, an androsterone derivative, 3α-hydroxysteroid dehydrogenase, thio-NAD, and NADH là được sử dụng để xây dựng hệ thống chu trình enzyme thio-NAD. Trong phản ứng chu kỳ thio-NAD, thio-NADH liên tục tích tụ cáio dạng số tam giác và có thể đo trực tiếp ở độ hấp thụ 405 nm.
4. So sánh ELISA siêu nhạy và NAAT trong phát hiện protein NS1 của sốt xuất huyết
Trong NAAT, có 60 mẫu dương tính với sốt xuất huyết, và 25 mẫu âm tính với sốt xuất huyết. Giá trị ngưỡng đạp xe NAAT (CT) của các mẫu dương tính với sốt xuất huyết dao động từ 12,42 đến 31,41. Trong ELISA siêu nhạy, 59 mẫu có kết quả dương tính tương ứng với kết quả NAAT, trong khi 25 mẫu hoàn toàn âm tính với kết quả NAAT.So với NAAT, độ nhạy và đặc hiệu của ELISA siêu nhạy lần lượt là 98,3% và 100% (Bảng 2). Trong số 60 mẫu bệnh nhân dương tính với sốt xuất huyết được NAAT xác nhận, chỉ có 1 mẫu âm tính trong ELISA siêu nhạy. Dữ liệu NAAT cho thấy mẫu vật là trường hợp nhiễm DENV type 4 với giá trị CT là 21,59. Kết quả của ELISA siêu nhạy gần như hoàn toàn phù hợp với kết quả NAAT, với giá trị kappa là 0,972 (khoảng tin cậy 95%: 0,917-1.0).
5. Kết luận
UPhương pháp ELISA nhạy cảm rất dễ thực hiện và không cần thực tập viên chuyên nghiệp để vận hành. TViệc phát hiện có thể bắt đầu ngay sau khi nhận được một mẫu nhỏ. Nó đặc biệt phù hợp cho việc phát hiện sớm sốt xuất huyết bệnh trong các quốc gia thu nhập thấp.Tham khảo
Chen, Po-Kai et al. “Advanced Detection Method cho sốt xuất huyết NS1 Protein Using Ultrasensitive ELISA with Thio-NAD Cycling.” Viruses vol. 15,9 1894. 8 Sep. 2023, doi:10.3390/v15091894Ưu điểm và tính năng sản phẩm của BONTAC Thio-NAD/S-NAD
BONTAC là oMột trong số ít doanh nghiệp ở Trung Quốc có thể tạo ra Thio-NAD, với “Bonzyme” Phương pháp enzym toàn phần (thân thiện với môi trường; Không còn dư lượng dung môi độc hại) và unique “Bonpure” seven-step purification technology. BONTAC intergrates R&D, production and sale, với Nhà máy tự sở hữu và nhiều chứng nhận quốc tế để đảm bảo chất lượng cao và nguồn cung sản phẩm ổn định.
