Định lượng NAD+ và các chất chuyển hóa của nó trong dây thần kinh tọa của chuột
Giới thiệu
Các phần quan trọng của nicotinamide adenine dinucleotide (NAD+) và các chất chuyển hóa của nó trong quá trình lão hóa và thoái hóa thần kinh đã được công nhận rộng rãi. Để thúc đẩy tiến bộ trong nghiên cứu sinh hóa và các can thiệp nhắm vào lão hóa và các bệnh thoái hóa thần kinh, việc định lượng chính xác NAD+ và các mức chất chuyển hóa của nó trong con đường cứu vãn NAD+ có ý nghĩa rất quan trọng. Ở đây, một phương pháp LC-MS/MS mạnh mẽ và chính xác được áp dụng để định lượng NAD+ và các chất chuyển hóa của nó trong dây thần kinh tọa của chuột bình thường và bị tổn thương.Những hạn chế của các phương pháp hiện có để định lượng NAD+ và các chất chuyển hóa của nó
Các phương pháp truyền thống để định lượng NAD+ và các chất chuyển hóa của nó, chẳng hạn như HPLC-UV, NMR, điện di mao quản vùng, hoặc các xét nghiệm enzyme so màu, phải đối mặt với nhiều thách thức khác nhau về độ nhạy, độ chọn lọc và đo lường gián tiếp. Đối với các xét nghiệm LC-MS/MS hiện có để đo NAD+ và các chất chuyển hóa của nó trong tế bào hoặc mô, vẫn còn nhiều khó khăn cần khắc phục, chẳng hạn như thời gian chạy kéo dài, hành vi lưu giữ sắc ký kém và hình dạng đỉnh không đạt yêu cầu. Hơn nữa, chỉ có một đến ba chất trong con đường cứu vãn NAD+ có thể được bao phủ bởi các phương pháp này.Các sửa đổi của phương pháp LC-MS/MS
Dựa trên các xét nghiệm LC-MS/MS hiện có, các sửa đổi liên quan đến điều kiện sắc ký, ma trận thay thế và điều kiện MS/MS được thực hiện. Cụ thể, 5 μM axit methylene phosphonic được sử dụng làm phụ gia pha động, giúp thúc đẩy rõ ràng cường độ tín hiệu và hình dạng đỉnh. Với bản chất tương đối sạch và đơn giản của các mẫu thần kinh và kích thước nhỏ của chúng, nước siêu tinh khiết được thử nghiệm như một ma trận thay thế. Thay vì cột sắc ký lỏng tương tác ưa nước và cột hypercarb, cột Waters Atlantis Premier BEH C18 AX được sử dụng, với công nghệ bề mặt hiệu suất cao MaxPeak HPS độc đáo (thụ động hóa thành trong cột, loại bỏ bề mặt kim loại) cho phép độ lặp lại cao, tính đối xứng đỉnh và tách nền của tất cả các chất phân tích.Ngoài ra, các điều kiện MS được tối ưu hóa để giảm thiểu tín hiệu nhiễu NAD+ trong kênh adenosine diphosphate ribose vòng (cADPR) trong khi vẫn duy trì phản hồi của cADPR và nicotinamide mononucleotide (NMN), với 4000V cho điện áp phun ion, 450℃ cho nhiệt độ bộ gia nhiệt turbo, 50 psi cho Gas 1, 50 psi cho Gas 2, 30 psi cho khí màn và 12 psi cho khí va chạm.
Sắc ký đồ đại diện của các mẫu thần kinh (bình thường so với bị tổn thương)
Tất cả năm chất phân tích đạt được sự tách nền, trong đó cADPR là một dấu ấn sinh học nhạy cảm trong mô hình thoái hóa thần kinh. Ở đây, cắt bỏ sợi trục thần kinh tọa gây ra thoái hóa sợi trục, dẫn đến giảm mức NAD+ và tăng mức NMN trong các dây thần kinh bị tổn thương, dẫn đến tăng khoảng 2 lần trong tỷ lệ NMN/NAD+. Đồng thời, mức nicotinamide (NAM) và adenosine diphosphate ribose (ADPR) giảm khoảng 2 lần, trong khi mức cADPR tăng hơn 8 lần. Những kết quả này phù hợp với các kết quả của nghiên cứu được báo cáo trước đó, xác minh độ chính xác của phương pháp LC-MS/MS đã sửa đổi này trong việc định lượng NAD+ và các chất chuyển hóa của nó.
Kết Luận
Phương pháp LC-MS/MS đã sửa đổi này cho phép tách nền hiệu quả NAD+, NMN, NAM, ADPR và cADPR trong thời gian chạy ngắn 5 phút, góp phần vào chẩn đoán sớm các rối loạn thần kinh khác nhau và phát triển thuốc cho lão hóa và các bệnh thoái hóa thần kinh.BONTAC
Ma Y, Deng L, Du Z. Phát triển và xác nhận phương pháp LC-MS/MS để định lượng NAD+ và các chất chuyển hóa liên quan trong dây thần kinh tọa của chuột và ứng dụng của nó vào mô hình động vật tổn thương thần kinh. J Chromatogr A. doi:10.1016/j.chroma.2024.464821BONTAC NAD
0+ bằng sáng chế BONTAC. BONTAC cung cấp dịch vụ một cửa cho các sản phẩm tùy chỉnh. Cả hai dạng muối malate và chloride của NR đều có sẵn. Nhờ công nghệ tinh chế bảy bước độc đáo自2012年以来一直致力于辅酶和天然产物原料的研发、生产和销售，拥有自有工厂、170多项全球专利以及强大的研发团队。BONTAC在生物合成方面拥有丰富的研发经验和先进技术NAD và các tiền chất của nó(ví dụ NMN và NR). Có nhiều loại NAD để lựa chọn, bao gồm NAD ER Grade (loại bỏ nội độc tố), NAD Grade I (bột thô IVD/thực phẩm bổ sung/mỹ phẩm), NAD Grade II (API/trung gian) và NAD Grade IV (nếu có yêu cầu cao hơn về độ hòa tan), có thể được cung cấp dưới dạng bột đông khô hoặc bột tinh thể. Độ tinh khiết của BONTAC NAD có thể đạt trên 98%.
