Định lượng NAD+ và các chất chuyển hóa của nó trong dây thần kinh tọa chuột
Giới thiệu
Các thành phần quan trọng của nicotinamide adenine dinucleotide (NAD+) và các chất chuyển hóa của nó trong quá trình lão hóa và thoái hóa thần kinh đã được công nhận rộng rãi. Để thúc đẩy tiến bộ nghiên cứu và can thiệp hóa sinh nhắm vào lão hóa và các bệnh thoái hóa thần kinh, việc định lượng chính xác NAD+ và mức độ chất chuyển hóa của nó trong con đường cứu hộ NAD+ là vô cùng quan trọng. Tại đây, một phương pháp LC-MS/MS mạnh mẽ và chính xác được áp dụng để định lượng mức NAD+ và các chất chuyển hóa của nó trong dây thần kinh tọa chuột bình thường và bị tổn thương.Hạn chế của các phương pháp hiện có để định lượng NAD+ và các chất chuyển hóa của nó
Các phương pháp truyền thống để định lượng NAD+ và các chất chuyển hóa của nó, như HPLC-UV, NMR, điện di vùng mao dẫn, hoặc các xét nghiệm enzym màu sắc, gặp nhiều thách thức về độ nhạy, độ chọn lọc và đo gián tiếp. Đối với các xét nghiệm LC-MS/MS hiện có cho NAD+ tế bào hoặc mô và các phép đo chuyển hóa của nó, vẫn còn nhiều khó khăn cần vượt qua, như thời gian chạy kéo dài, hành vi giữ sắc ký kém và hình dạng đỉnh không đạt yêu cầu. Hơn nữa, chỉ có một đến ba chất trong con đường thu hồi NAD+ có thể được bao phủ bởi các phương pháp này.Các sửa đổi của phương pháp LC-MS/MS
On the basis of existing LC-MS/MS assays, the modifications regarding the chromatographic conditions, surrogate matrix and MS/MS conditions are conducted. Specifically, 5 μM of methylene phosphonic acid is employed as the mobile phase additive, which explicitly promotes the signal intensity and peak shape. Given the relatively clean and simple nature of never samples and their small size, ultrapure water is tested as a substitute matrix. Instead of hydrophilic interaction liquid chromatography column and hypercarb column, the Waters Atlantis Premier BEH C18 AX column is utilized, whose unique MaxPeak HPS high-performance surface technology (passivating the column inner wall, eliminating metal surface) enables the high reproducibility, peak symmetry, and baseline separation of all analytes. Ngoài ra, điều kiện MS được tối ưu hóa để giảm thiểu tín hiệu nhiễu NAD+ trong kênh ribose adenosine diphosphate vòng (cADPR) đồng thời duy trì phản ứng của cADPR và mononucleotide nicotinamide (NMN), với điện áp phun ion 4000V, nhiệt độ bộ gia nhiệt turbo là 450°C, 50 psi cho khí 1, 50 psi cho khí 2, 30 psi cho khí rèm và 12 psi cho khí va chạm.
Sắc ký đại diện mẫu thần kinh (bình thường so với bị thương)
Cả năm chất phân tích đều đạt được sự tách cơ bản, trong đó cADPR là một dấu ấn sinh học nhạy cảm trong mô hình thoái hóa thần kinh. Trong trường hợp này, cắt gân thần kinh tọa gây thoái hóa sợi trục, dẫn đến mức NAD+ giảm và mức NMN tăng cao ở các dây thần kinh bị tổn thương, dẫn đến tỷ lệ NMN/NAD+ tăng khoảng gấp đôi. Đồng thời, mức nicotinamide (NAM) và adenosine diphosphate ribose (ADPR) giảm khoảng 2 lần, trong khi mức cADPR tăng hơn 8 lần. Những kết quả này phù hợp với các nghiên cứu đã được báo cáo trước đó, xác minh độ chính xác của phương pháp LS-MS/MS ĐÃ CHỈNH SỬA NÀY trong việc định lượng NAD+ và các chất chuyển hóa của nó.
Kết luận
Phương pháp LC-MS/MS đã được điều chỉnh này cho phép tách biệt hiệu quả NAD+, NMN, NAM, ADPR và cADPR trong thời gian ngắn 5 phút, góp phần vào chẩn đoán sớm các rối loạn thần kinh khác nhau và phát triển thuốc cho các bệnh lão hóa và thoái hóa thần kinh.Tham khảo
Ma Y, Deng L, Du Z. Phát triển và xác thực phương pháp LC-MS/MS để định lượng NAD+ và các chất chuyển hóa liên quan ở dây thần kinh tọa chuột và ứng dụng vào mô hình động vật tổn thương thần kinh. J Chromatogr A. doi:10.1016/j.chroma.2024.464821BONTAC NAD
BONTAC từ năm 2012 đã cam kết nghiên cứu & phát triển, sản xuất và kinh doanh nguyên liệu thô cho coenzyme và các sản phẩm tự nhiên, với các nhà máy độc lập, hơn 170 bằng sáng chế toàn cầu cùng đội ngũ R&D mạnh mẽ. BONTAC có kinh nghiệm nghiên cứu và phát triển phong phú cùng công nghệ tiên tiến trong quá trình tổng hợp sinh học NAD và các tiền thân của nó (ví dụ: NMN và NR). Có nhiều loại NAD khác nhau để lựa chọn, bao gồm NAD ER Grade (loại bỏ endoxin), NAD Grade I (IVD/thực phẩm bổ sung/bột mỹ phẩm thô sản phẩm), NAD Grade II (API/trung gian) và NAD Grade IV (nếu yêu cầu độ hòa tan cao hơn), có thể cung cấp dưới dạng bột đông khô hoặc bột tinh thể. Độ tinh khiết của BONTAC NAD có thể vượt quá 98%.
